99久久国产免费福利-亚洲国产日韩欧美精品网站-亚洲欧美有码日韩在线播放-伊人精品无码av一区二区三区-国产精品视频九九

實(shí)驗前準備：

1.仔細閱讀使用說(shuō)明書(shū)。

2.提前20min 從冰箱中取出試劑盒，使試劑盒各組分平衡至室溫；

3.用FITC助溶劑（DMSO，使用前需要放在室溫融化）溶解FITC。

 特別提示：

A.溶解的活好FITC最好一次性使用完，如果使用不完可以密封放在-20℃的冰箱內，一周內可以使用，但是標記效率會(huì )降低；

B.FITC助溶劑使用完之后需要立即密封保存，防止吸潮。

操作步驟：（本操作步驟按照 1mg抗體的量進(jìn)行標記）

1.取1mg 待標記抗體于超濾管中，并加入不超過(guò)超濾管最大體積的標記緩沖液， 12,000 g 離心 10min；可以重復此步驟多次；最后一次超濾完成，可以加入適量標記緩沖液調整抗體的濃度到2mg/mL左右；

A.超濾管的最大體積和最大截留分子量，本實(shí)例超濾管的最大體積為 0.5mL；

B.如果待標記抗體濃度低時(shí)，可先超濾離心濃縮；

C.如果待標記物含有游離的氨基（Tris,氨基酸或者其他干擾物，需要用標記緩沖液反復超濾確保其去除干凈）。

2.加入溶解的FITC 50μL至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育 60min以上；

3.標記結束以后加入 1/10體積的FITC清除指示劑至上述超濾管中；

4.12,000g 離心 10min；

5.加入適量標記緩沖液至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻，12,000g 離心 10min。并重復操作多次，直至超濾管中沒(méi)有藍色，未標記的FITC被徹底清除干凈；收集超濾管中的溶液，即為FITC標記抗體。

標記偶聯(lián)比率的計算:

C是某個(gè)蛋白的一個(gè)常數；

MW是蛋白的分子量；

389是FITC的分子量；

195是偶聯(lián)的FITC在490nm（PH13.0）情況下1mg/ml的吸光值；

(0.35ⅹA495)是FITC在280nm情況下吸光值的校正系數；

E0.1%是1.0 mg/ml的蛋白在280nm的吸光值。