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- 產(chǎn)品名稱(chēng)： 堿性磷酸酶-抗體快速標記試劑盒
- 產(chǎn)品貨號： ARL0600k-1
- 貨期： 現貨
- 價(jià)格與訂購： 3880
- 數量：
庫存： 10
- 規格： 200T 2000T
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
產(chǎn)品介紹
堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,以下簡(jiǎn)稱(chēng)AP)分子量140,000Da,在分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)研究中的主要應用是從DNA中去除5'-磷酸基團或作為免疫分析（如ELISA）的報告系統。在免疫分析測試中，酶通常與特定的一級或二級抗體結合，其活性用顯色（或發(fā)光）底物檢測。
本試劑盒可以幫助實(shí)驗者快速實(shí)現AP與抗體的偶聯(lián)。
基本原理
本試劑盒利用抗體和AP上游離的伯氨基（-NH2），采用定向對接偶聯(lián)技術(shù)將抗體分子與AP共價(jià)偶聯(lián)，主要特點(diǎn)：
1、試劑盒組分齊全，操作簡(jiǎn)單，只要按照操作步驟進(jìn)行便可得到高品質(zhì)AP偶聯(lián)抗體；
2、本試劑盒所配置的AP為高純度，高活性酶，催化發(fā)光/顯色效率更高；
3、本試劑采用定向偶聯(lián)技術(shù)，AP酶和抗體都不會(huì )發(fā)生自連，保證偶聯(lián)物的特異性和均一性；
試劑盒已經(jīng)提供材料
| 試劑盒規格 | 20X3T | 200X1T | 200X3T | 2000X1T |
| 可標抗體量 | 30∽60ug | 100∽200ug | 300∽600ug | 1∽2mg |
| 可標抗體次數 | 3 | 1 | 3 | 1 |
| 組分名稱(chēng) | 各組分配置數量 | |||
| 活化AP凍干粉 | 50ugX3 | 500ug | 500ugX3 | 5mg |
| 標記緩沖液 | 30ml | 30ml | 30ml | 30ml |
| 抗體修飾試劑 | 30ul*1 | 30ul*1 | 30ul*1 | 30ul*1 |
| 30KMWCO超濾管 | 3支 | 1支 | 3支 | 1支 |
| 封閉試劑 | 50ug*3支 | 50ug*1支 | 50ug*3支 | 50ug*1支 |
| DMSO溶劑 | 200ul | 200ul | 200ul | 200ul |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 | |||
其他需要自備試劑材料
待標記的生物分子；
移液器及吸頭；
去離子水。
試劑盒儲存
試劑盒抗體修飾試劑放在-20?C，其余組分放在2-8℃可保存6個(gè)月以上。
試劑盒操作流程
1.抗體的修飾
1）取待標記抗體（純度>90%），濃度調整到 5mg/ml左右為宜，按照每mg抗體加入
2μl 抗體修飾試劑溶液，輕輕混勻，在室溫下避光攪拌反應 90分鐘；【如果抗體量太少，抗體修飾試劑溶液加入量不少于0.5ul】
2）反應完畢后，將其轉入30KMWCO超濾管，用標記緩沖液超濾3-5次（每次12000rpm 5min），每次管芯內液體體積不超過(guò)原體積1/4為宜，最后一次超濾完成，管芯內液體即為修飾的抗體。
2.活化AP與抗體偶聯(lián)
1）用標記緩沖液復溶活化AP凍干粉，得到活化AP溶液，濃度調整為5mg/ml（如，按50ug活化AP凍干粉加入10ul標記緩沖液復溶）；
2）將修飾抗體與活化AP溶液，按照質(zhì)量比1:2.5比例（每mg修飾抗體對應2.5mg活化AP溶液,50ug 活化AP可以標記20ug抗體）混合，室溫避光反應2小時(shí)；
3）將封閉試劑管中加入5ul DMSO,配置成10mg/ml封閉試劑溶液；按照每0.5mg抗體5ul的體積比例加入上述步驟2）反應產(chǎn)物中，封閉未反應完的活性基團；【如果抗體量太少，抗體封閉試劑溶液加入量不少于0.5ul】
4）標記好的抗體分裝，加入適當保護劑，-20℃保存備用。
注意事項
1）本試劑盒中抗體修飾試劑和封閉試劑為高活性試劑，請-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿凍存。
2）試劑盒組份在運輸過(guò)程中可能造成顛倒，會(huì )使液體或干粉試劑粘到管壁或瓶蓋上。使用前請離心處理，以使附著(zhù)管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底。
3）本試劑盒中活化AP凍干粉需要避光低溫保存，一旦復溶請一次性使用完；標記過(guò)程盡量保證其避光；
4）封閉劑需現用現配，干粉溶解后不能長(cháng)期保存；
5）使用本試劑盒標記抗體，其抗體特異性要高，純度不低于90%，最好使用單克隆抗體，溶液環(huán)境不含游離氨基，最好為PBS溶液；標記前抗體需去除NaN3和BSA，抗體的透析、濃縮和濃度測定等操作都會(huì )造成抗體量的損失，因此標記前準備抗體時(shí)需根據具體情況考慮最適的抗體量；
6）由于抗體修飾后所帶的基團容易被重新氧化，因此修飾后抗體需盡快與活化的AP進(jìn)行偶聯(lián)；
7）本試劑盒中的超濾管為特殊處理的，可有效避免酶失活和蛋白吸附損失，市面超濾管可能會(huì )對標記效率造成影響。
8）本試劑盒中部分試劑為高活性試劑，對皮膚和身體有一定的危害，請全程戴手套操作；DMSO屬微毒類(lèi)，對人體皮膚有滲透性，對眼有刺激作用，使用時(shí)避免與皮膚、眼睛和粘膜接觸。
Note
For research use only .
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