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- 產(chǎn)品名稱(chēng)： cGMP ELISA Kit檢測試劑盒
- 產(chǎn)品貨號： BK201
- 貨期： 現貨
- 價(jià)格與訂購： 3800
- 數量：
庫存： 5
- 規格： 96T
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
背景介紹
cAMP和cGMP都是小分子的環(huán)狀核苷酸，以微量存在于動(dòng)植物細胞和微生物中，被稱(chēng)其為細胞內的第二信使（激素為第一信使）。
cAMP（或cGMP）由腺苷酸（或鳥(niǎo)苷酸）環(huán)化酶產(chǎn)生，被磷酸二酯酶降解，因此激活腺苷酸（或鳥(niǎo)苷酸）環(huán)化酶或者抑制磷酸二酯酶，可以提高細胞內cAMP（或cGMP）的含量。研究發(fā)現，cAMP（或cGMP）特異性磷酸二酯酶的抑制劑可用于人類(lèi)疾病的治療。如：增強β腎上腺素能受體（cAMP的封閉劑）已被用于心率失調、高血壓、心肌梗死等心臟疾??；cAMP特異性磷酸二酯酶2/4的抑制劑正在進(jìn)行認知增強方面的臨床測試；而cGMP特異性磷酸二酯酶類(lèi)型5可用于治療ED等疾病。
在五十年的研究歷程中，從開(kāi)始研究cAMP，cGMP在各種生理過(guò)程中的調節作用，到近幾年與之相關(guān)的藥物研發(fā)，藥物篩選領(lǐng)域，人們一直在努力尋找一種快速、靈敏、特異性和可重復地定量檢測cAMP和cGMP含量的方法。
cAMP，cGMP分子量分別只有329.21和345.21，在機體內的含量極低，為pmol/L級別，用一般的分析方法無(wú)法測定。70年代一系列測定cAMP和cGMP的方法被發(fā)明出來(lái)，最基本的原理有三種：分別是競爭性蛋白質(zhì)結合分析法、放射性免疫分析法和薄層色譜法。
本試劑盒利用競爭酶聯(lián)免疫分析方法來(lái)測定細胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實(shí)驗中的cGMP的水平。包被羊抗鼠多克隆抗體在酶標板上，細胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實(shí)驗中的cGMP與固定數量的標記辣根過(guò)氧化物酶的cGMP競爭性的結合抗cGMP單克隆抗體，采用已知濃度的cGMP標準品來(lái)做標準曲線(xiàn)。檢測450nm波長(cháng)下的OD值，吸光度OD值與樣品中cGMP的濃度呈反比關(guān)系?；赾GMP標準品所得曲線(xiàn)，通過(guò)測得的OD值可以計算出樣品中cGMP的濃度，本試劑盒IC50（50% B/B0）約5 pmol/mL，檢測限約0.1 pmol/mL。
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所需材料
酶標儀（檢測波長(cháng)450 nm，參比波長(cháng)630nm）
各種型號加樣槍和槍頭
EP管
微孔板振蕩器
吸水紙
去離子水
樣本處理
組織樣本：新鮮收集的組織樣本必須立即凍存在液氮中。使用前去除冰凍樣本稱(chēng)重，加入5-10倍體積的0.1M HCl。用勻漿器在冰上勻漿。然后室溫離心5min（＞600 g）。留上清，可以直接實(shí)驗，或用0.1M HCl稀釋。
細胞樣本：去除培養基，加入適量0.1M HCl（在0.1M HCl中加入0.1%~1% Triton X-100可增強細胞的溶解效果），放置10min，期間觀(guān)察以確認細胞是否發(fā)生溶解。如果溶解不充分，可以再增加10min，直至細胞完全溶解。室溫離心5min（600 g）。留上清，用于本試劑盒檢測。注：上述濃度的Triton X-100不會(huì )影響樣品與板的結合，但可能會(huì )增加背景值，建議用含相同濃度Triton X-100稀釋標準品，以去除誤差。
尿液、血漿和培養液：每ml樣品中加入10μl濃鹽酸（12M），混勻后，室溫離心5min（600 g），留上清，用于本試劑盒檢測。血漿、血清、全血和組織勻漿通常含有磷酸二酯酶（phosphodiesterases）和大量免疫球蛋白（Ig），它們會(huì )干擾實(shí)驗。用0.1 M HCl處理樣品，可以滅活磷酸二酯酶和降低免疫球蛋白的濃度，使之可以用于本試劑盒。磷酸二酯酶和免疫球蛋白也可以通過(guò)加入2% TCA（三氯乙酸）使之沉淀或用截留分子量10 KD的超濾離心管去除。
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注意事項
1.本試劑盒所有相關(guān)試劑均預先平衡至室溫（20-25℃）。
2.各孔分別加入標準品和樣品。
3.沿孔壁加入各試劑，避免交叉污染。
4.本試劑盒提供的是可分拆的孔板條，使用者可以按照樣品數量選擇使用量。未用的孔板請放回原封口袋，保存在4℃?？装逭埛旁诒驹噭┖信渌偷目装寮苌鲜褂?。
5.加入底物前，請確?？字袥](méi)有殘余液體。
6.終止液具有腐蝕性，請小心使用。
For Research Use Only.
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