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  • 產(chǎn)品名稱(chēng)： RhoA Activation Assay Kit
  • 產(chǎn)品貨號： 80601
  • 貨期： 現貨
  • 價(jià)格與訂購： 6800
  • 數量：
    庫存： 5
  • 規格： 96T
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購
    產(chǎn)品說(shuō)明
      小 G 蛋白是從屬于細胞調節因子中的一個(gè)超家族。Rho 家族是小 G 蛋白中的一個(gè)亞家族，它在細胞運動(dòng)、細胞分裂以及基因轉錄中發(fā)揮主要作用。而本試劑盒中的 RhoA 就屬于Rho 亞家族中的一種， RhoA 參與生理活動(dòng)過(guò)程中其分子結構會(huì )呈現出 2 種相互轉換的形式：與 GTP 結合的激活狀態(tài)和與 GDP 結合的非活性狀態(tài)。
        目前RhoA蛋白活性的檢測主要是依據小GTP酶RhoA可以與RhoA效應蛋白(Rhotekin)的 RBD 區域結合，使 RhoA 效應蛋白活化從而發(fā)揮生物學(xué)功能，進(jìn)而間接的進(jìn)行 RhoA 活性功能的監測。然而此方法在檢測過(guò)程中存在著(zhù)一定的局限性比如 GTP 水解成 GDP 的速度過(guò)快以及 RhoA-GTP 結合蛋白與 RBD 結合區域之間較低的親和力，導致這種檢測方法的重復性較差。
       RhoA 活性檢測試劑盒主要是依據單克隆抗體能夠特異性的識別特殊構象的 RhoA-GTP 結合蛋白，而不識別 RhoA-GDP 結合蛋白，進(jìn)而簡(jiǎn)單并且快速的進(jìn)行 RhoA 的活性檢測。同時(shí)試劑盒中的 RhoA-GTP 單克隆抗體也可以進(jìn)行免疫組化實(shí)驗中細胞和組織中 RhoA 的活性監測。每套試劑盒可以進(jìn)行 20 次檢測。檢測原理
      RhoA 活性檢測試劑盒主要是利用識別蛋白特異構象的 RhoA-GTP 單克隆抗體特異性的去檢測細胞提取物或者體外的（樣品需要進(jìn)行 GTPγS 活化處理）活性 RhoA-GTP 的水平。簡(jiǎn)言之，特異性識別 RhoA 活化構象的鼠單克隆抗體可以特異性結合細胞裂解液中的 RhoA-GTP 活性蛋白，然后利用 protein A/G 將抗原抗體的結合物吸附下來(lái)，再利用特異性識別 RhoA 活化構象的兔多克隆抗體進(jìn)行免疫印跡分析進(jìn)行檢測。 
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    Assay Principle
    Bioyears Biosciences RalA Activation Assay Kit bases on the configuration-specific anti Ral GTP monoclonal antibody to measure the active Ral-GTP levels, either from cell extracts or from in vitro GTPγS loading Ral activation assays. Briefly, anti active Ral mouse monoclonal antibody will be incubated with cell lysates containing Ral-GTP. The bound active Ral will then be pulled down by protein A/G agarose. The precipitated active RalB or RalA will be detected by immunoblot analysis using anti RalB or RalA rabbit polyclonal antibody, respectively.
    試劑盒成分
    1. 特異性識別 RhoA 活性構象的鼠單克隆抗體（Anti active RhoA, Mouse Monoclonal  Antibody (Catalog No. 26904)）：小管裝--30ul (抗體濃度是 1mg/ml)，抗體溶于 PBS（pH7.4）并包含 50%的甘油和 0.05%的疊氮化鈉。此抗體可以特異性識別所有脊椎動(dòng)物中的  RhoA-GTP。
    2. Protein A/G agarose (Catalog No. 30301) ：小管裝—400ul 包含 200ul Protein A/G agarose和 200ul 20%乙醇溶液。（使用時(shí)溶液需要充分混勻，再吸?。?/div>
    3. 5X Assay/Lysis Buffer (Catalog No. 30303)：小瓶裝—30mL 包含 250 mMTris-HCl (pH8.0),750 mM NaCl, 50 mM MgCl2, 5 mM EDTA, 5% Triton X-100。
    4. 特異性識別 RhoA 活性構象的兔多克隆抗體（Anti RhoA, Rabbit Polyclonal Antibody
        (Catalog No.21009)）：小管裝--30ul (抗體濃度是 1mg/ml)，抗體溶于 PBS（pH 7.4包含有 50%的甘油。
    5. 100 X GTPγS (Catalog No. 30302) ：小管裝—100ul (10 mM) ，實(shí)驗中 0.5mL 細胞裂解液使用 5ul GTPγS 標記。
    6. 100 X GDP (Catalog No. 30304) ：小管裝—100ul (100 mM) ，實(shí)驗中 0.5mL 細胞裂解液使用 5ul GDP 標記。
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    儲存條件
    試劑盒的成分在試劑盒的有效期限內必須存放于 4°C 條件下保存。
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    Note
    For Research Use Only.