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一 、熱激轉化法

1.從-80℃冰箱取出感受態(tài)細胞冰浴融化后，吸取100μl感受態(tài)細胞轉移到-20℃過(guò)夜預冷的搖菌管 中，加入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物，輕輕混勻，冰浴30分鐘。

2.42℃水浴熱激60秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)搖菌管。

3.向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB（SOC培養基可提高2-3倍轉化效率），37℃、180rpm、45分鐘復蘇菌種。

4.根據實(shí)驗要求（質(zhì)粒），吸取不同體積已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的LB瓊脂培養基上，將細胞均勻涂開(kāi)。將平板置于37℃至液體被吸收，倒置平板，37℃過(guò)夜。

 二、10分鐘快速轉化法                             

注：在使用卡那霉素，四環(huán)素等作為篩選抗性時(shí)，需要在SOC培養基中復蘇以提高轉化效率，當使用氨芐青霉素作為篩選抗性時(shí)，該步驟可以省略。感受態(tài)細胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養基，在37℃ 180rpm孵育1小時(shí)，然后轉移到37℃預熱的LB培養基上

1. 提前15分鐘將用到的篩選培養基平板拿到37℃預熱。

2. BL 21(DE3)感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)      粒）并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰中靜置5分鐘。

3. 用200μl槍將感受態(tài)細胞-DNA混合物轉移到已經(jīng)37℃預熱的LB培養基上，涂均勻，表面無(wú)水        漬。錨點(diǎn)

4. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。