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- 產(chǎn)品名稱(chēng)： DH 10β Chemically Competent Cell
- 產(chǎn)品貨號： CSKT102L
- 貨期： 現貨
- 價(jià)格與訂購： 360
- 數量：
庫存： 5
- 規格： 200×100ul
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
產(chǎn)品規格
RAW264.7小鼠單核巨噬細胞
基因型
F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galE15 galK rpsL nupG λ-
icon 產(chǎn)品說(shuō)明
DH 10β菌株來(lái)源于MC1061菌株，消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS的限制系統，使DH 10β感受態(tài)細胞適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA，允許構建更多具有代表性的基因組文庫。recA1和endA1的突變有利于穩定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。rpsL賦予其鏈霉素抗性，φ80lacZ?M15 的存在使DH 10β可用于藍白斑篩選。DH 10β感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率>108cfu/μg DNA。
操作方法
一 、熱激轉化法
1. 從-80℃冰箱取出感受態(tài)細胞冰浴融化后，吸取100μl感受態(tài)細胞轉移到-20℃過(guò)夜預冷的搖菌管中，加入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物，輕輕混勻，冰浴30分鐘。
2. 42℃水浴熱激60秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)搖菌管。
3. 向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB（SOC培養基可提高2-3倍轉化效率），37℃、180rpm、45分鐘復蘇菌種。
4. 根據實(shí)驗要求（質(zhì)粒，重組連接產(chǎn)物轉化），吸取不同體積已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的LB瓊脂培養基上，將細胞均勻涂開(kāi)。將平板置于37℃至液體被吸收，倒置平板，37℃過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15小時(shí)。
二 、10分鐘快速轉化法
注：在使用卡那霉素，四環(huán)素等作為篩選抗性時(shí)，需要在SOC培養基中復蘇以提高轉化效率，當使用氨芐青霉素作為篩選抗性時(shí)，該步驟可以省略。感受態(tài)細胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養基，在37℃ 180rpm孵育1小時(shí)，然后轉移到37℃預熱的LB培養基上。
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養基平板拿到37℃預熱。
2. DH 10β感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細胞-DNA混合物轉移到已經(jīng)37℃預熱的LB培養基上，涂均勻，表面無(wú)水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15小時(shí)。
注意事項
1. 剛剛化凍的細胞，轉化效率最高。
2. 避免反復化凍。
3. 避免移液槍吹吸。
4. 整個(gè)操作過(guò)程要輕柔。
5. 重組產(chǎn)物不建議用10分鐘快速轉化法。
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