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- 產(chǎn)品名稱(chēng)： Flag標簽蛋白純化試劑盒
- 產(chǎn)品貨號： CSPR0023K
- 貨期： 現貨
- 價(jià)格與訂購： 1880
- 數量：
庫存： 10
- 規格： 1ml*2 5ml
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
試劑盒組分
| 產(chǎn)品編號 | 預裝柱 | 濃縮基礎緩沖液(10×) | 濃縮洗脫緩沖液(10×) | 濃縮再生緩沖液(10×) |
| CSPPR0023K | 1ml*2 | 30ml | 15ml | 15ml |
| 5ml | 30ml*2 | 30ml | 30ml |
產(chǎn)品介紹
Flag標簽是一個(gè)由八個(gè)親水氨基酸組成的多肽片段，定位在融合蛋白表面，因此更易與抗體結合以及被腸激酶分解。Flag標簽蛋白純化試劑盒是以抗Flag(DYKDDDDK)抗體為親和配體，一步純化原核、酵母或哺乳動(dòng)物細胞表達的Flag標簽融合蛋白。Flag標簽蛋白純化試劑盒里的純化填料以4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，雜蛋白非特異性結合少，可用于Flag標簽融合蛋白的純化和免疫沉淀（IP）。
產(chǎn)品使用操作
1.樣品準備
上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強度和pH值，可以用平衡液對樣品或細胞培養液稀釋,或者用平衡液透析。
樣品在上樣前建議離心或用0.22 μm或0.45 μm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì),提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。
2.緩沖液的準備
基礎緩沖液:按照實(shí)驗所用量，取試劑盒中濃縮基礎緩沖液，加入9倍體積的去離子水稀釋成基礎緩沖液；
洗脫液:按照實(shí)驗所需用量，取試劑盒中濃縮洗脫液，加入9倍體積的去離子水稀釋成洗脫液；
再生液:按照實(shí)驗所需用量，取試劑盒中濃縮再生液，加入9倍體積的去離子水稀釋成再生液；
緩沖液在使用之前建議用0.22μm或0.45μm濾膜過(guò)濾。
3. Flag Beads純化柱的準備
取出試劑盒中預裝柱平衡到室溫，打開(kāi)純化柱底部開(kāi)關(guān)，用3-5個(gè)體積去離子水沖洗柱床，隨后用5-10個(gè)柱床體積基礎緩沖液平衡柱子，確保柱床無(wú)氣泡。
4.從樣品中純化目標蛋白
1）使用蠕動(dòng)泵上樣或者直接上樣（重力法）；
上樣量不要超過(guò)柱子的結合能力。
2）上樣完畢后，用基礎緩沖液洗掉未結合的雜蛋白，直到到紫外吸收監測儀達到一個(gè)穩定的基線(xiàn)（一般需要10-15個(gè)柱體積）；
3）使用洗脫液洗脫目的蛋白，順次接收并做好標記，直到到紫外吸收監測儀達到一個(gè)穩定的基線(xiàn)（一般需要5-10個(gè)柱體積）；
4）SDS-PAGE檢測分析得到的純化樣品（包括流穿組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品。
5.純化柱清洗、再生與保存。
1）5-10倍柱床體積的洗脫緩沖液繼續清洗；
2）3倍柱床體積的去離子水清洗；
3）5-10倍柱床體積的0.1M NaOH溶液；
4）3倍柱床體積去離子水清洗后于含20%乙醇的PBS 2-8℃保存。
Note
For research use only .
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